Эксперимент принцибы
Гемоглобин электрофорезы төрле нормаль һәм аномаль гемоглобиннарны ачыклау һәм раслау максатын куя.
Төрле гемоглобин төрләренең төрле корылмалары һәм изоэлектрик нокталары аркасында, билгеле бер pH буфер эремәсендә, гемоглобинның изоэлектрик ноктасы буфер эремәсенең pH-тан түбән булганда, гемоглобин тискәре корылма йөртә һәм электрофорез вакытында анодка күчә. Киресенчә, уңай корылма булган гемоглобин катодка таба хәрәкәт итә.
Билгеле көчәнеш астында һәм билгеле электрофорез вакытыннан соң, төрле зарядлы һәм молекуляр авырлыктагы гемоглобиннар төрле миграция юнәлешләрен һәм тизлеген күрсәтәләр. Бу аерым зоналарны аерырга мөмкинлек бирә, һәм аннан соң колориметрик яки электрофоретик сканерлау анализы бу зоналарда төрле гемоглобиннарны бәяләү өчен ясалырга мөмкин. Иң еш кулланыла торган ысул - pH 8,6 целлюлоза асетат мембранасы электрофорезы.
Opитоплазма эчендә гликоген яки полисахарид матдәләрендә булган этилен гликол төркемнәре (мукополисахаридлар, мукопротеиннар, гликопротеиннар, гликолипидлар һ.б.) периодик кислота белән оксидлаштырыла һәм альдегид төркемнәренә әверелә (CHO-CHO). Бу альдегид төркемнәре төссез кызгылт-кызыл Шифф реагенты белән берләшеп, күзәнәктә полисахаридлар булган куе кызыл-кызыл буяу барлыкка китерәләр. Бу реакция периодик кислота-Шифф (PAS) буяу дип атала, элек гликоген буяу дип аталган.
Эксперимент ысулы
Материаллар:Cellеллюлоза асетатмемтормоз, электрофорез аппараты(DYCP-38C һәм электр белән тәэмин итү DYY-6C), Supгары үрнәк йөкләү коралы (пипетта), спектропотометр, колориметрик куветлар, буферлар.
Буфер:
(1) pH 8.6 TEB Буфер: 10,29 г Трис, 0,6 г ЭДТА, 3,2 г бор кислотасы, һәм 1000 млга дистилляцияләнгән су кушыгыз.
(2) Борат буферы: авырлыгы 6,87 г борак һәм 5,56 г бор кислотасы, һәм дистилляцияләнгән су 1000 млга кушыгыз.
Процедура:
PГемоглобин чишелешен каплау
Антикоагулант буларак гепарин яки натрий цитраты булган 3 мл кан алыгыз. 2000 минутта центрифуга 10 минут эчендә плазманы ташлагыз. Кызыл кан күзәнәкләрен физиологик тоз белән өч тапкыр юыгыз (750 әйләнеш, һәрвакыт 5 минут центрифугация). Centентрифуга 2200 минутта 10 минут эчендә һәм супернатантны ташлагыз. Тигез күләмдә дистилляцияләнгән су өстәргә, аннары углерод тетрахлорид күләменең 0,5 тапкыр өстәргә. 5 минутка көчле селкетегез, аннары центрифуга 2200 минутта 10 минут эчендә Hb өске эремәсен соңрак куллану өчен.
Мембрананы сугару
Cellеллюлоза асетат мембранасын 3 см × 8 см полосаларга кисегез. Аларны pH 8.6 TEB буферына тутырыгыз, тулы туенганчы, аннары фильтр кәгазе белән киптерегез.
Күрү
10 μл гемоглобин эремәсен вертикаль рәвештә целлюлоза асетат мембранасына (тупас ягы) табу өчен, читтән 1,5 см ераклыкта табыгыз.
Электрофорез
Электрофорез палатасына борат буфер эремәсен салыгыз. Палатаның катод очында тапланган ягы белән целлюлоза асетат мембранасын урнаштырыгыз. 200 В 30 минутта йөгерегез.
Elution
HbA һәм HbA2 зоналарын кисегез, аларны аерым сынау трубкаларына урнаштырыгыз, тиешенчә 15 мл һәм 3 мл дистилляцияләнгән су кушыгыз. Гемоглобинны тулысынча бетерү өчен әкрен генә селкетегез, аннары кушыгыз.
Колориметрия
Элитация эремәсе өчен дистилляцияләнгән су кулланып, үзләштерүне нуль һәм 415 нм га сеңдерүне үлчәгез.
Хисаплау
HbA2 (%) = HbA2 трубасының абсорбциясе / (HbA трубасының абсорбциясе × 5 + HbA2 трубасының абсорбциясе) × 100%
Эксперименталь нәтиҗәләрне исәпләү
PH 8.6 TEB буферы целлюлоза асетат электрофорезы өчен белешмә диапазоны: HbA> 95%, HbA2 1% -3.1%
Искәрмәләр
Электрофорез вакыты артык озын булырга тиеш түгел. Электрофорез вакытында целлюлоза асетат мембранасы кипмәскә тиеш. HbA һәм HbA2 ачык аерылганда электрофорезны туктатыгыз. Озакка сузылган электрофорез полосаның таралуына һәм төссезләнүенә китерергә мөмкин.
Артык үрнәк кулланудан сакланыгыз. Артык гемоглобин сыеклыгы полоса отрядына яки җитәрлек буяуга китерергә мөмкин, нәтиҗәдә HbA дәрәҗәсе ялган.
Cellеллюлоза асетат мембранасының протеиннар белән пычрануын булдырмагыз.
Ток артык югары булырга тиеш түгел; югыйсә, гемоглобин полосалары аерылырга мөмкин түгел.
Normalәрвакыт нормаль шәхесләрдән үрнәкләр һәм контроль буларак билгеле аномаль гемоглобиннарны кертегез.
Пекин Люйи биотехнологиясе модель булган гемоглобин электрофорезы өчен профессиональ электрофорез танкы җитештерәDYCP-38Cцеллюлоза ацетат мембранасы электрофорез танкы, һәм целлюлоза асетат мембранасы электрофорез танкы өчен электрофорез электр белән тәэмин итүнең ике моделе бар.DYY-2CһәмDYY-6Cэлектр белән тәэмин итү.
Шул ук вакытта Пекин Люйи биотехнологиясе клиентлар өчен целлюлоза асетат мембранасын тәэмин итә, һәм целлюлоза асетат мембранасы зурлыгы көйләнә ала. Бездән үрнәкләр һәм күбрәк мәгълүмат сорарга рәхим итегез.
Пекин Люйи брендының Кытайда 50 елдан артык тарихы бар һәм компания бөтен дөнья буенча тотрыклы һәм югары сыйфатлы продуктлар белән тәэмин итә ала. Еллар дәвамында ул сезнең сайлауга лаек!
Хәзер без партнерлар эзлибез, OEM электрофорез танкы да, дистрибьюторлар да каршы ала.
Әгәр безнең продуктлар өчен сатып алу планы булса, зинһар, безнең белән элемтәгә керергә курыкмагыз. Сез безгә электрон почта аша хәбәр җибәрә аласыз[электрон почта сакланган]яки[электрон почта сакланган], яки зинһар, безгә +86 15810650221 телефоны буенча шалтыратыгыз яки Whatsapp +86 15810650221 яки Вечатны өстәгез: 15810650221
Пост вакыты: 20-2023 сентябрь